Esta practica la realizamos para aprender a manejar medios de cultivo y analizar productos líquidos teniendo en cuenta métodos para contar unidades formadoras de colonia de hongos, teniendo en cuenta la teoría buscada y las explicaciones del instructor se realizo la practica en el laboratorio de microbiología tomando como base el producto liquido el cual era un Tampico y otros instrumentos del laboratorio.
Los recuentos de microorganismos viables se basan en el número de colonias que se desarrollan en placas previamente inoculadas con una cantidad conocida de alimento e incubadas en unas condiciones ambientales determinadas. Estos recuentos no pueden considerarse como recuentos totales ya que solo son susceptibles del contaje aquellos microorganismos capaces de crecer en las condiciones establecidas. Se puede conseguir una amplia gama de condiciones variando la temperatura, la atmósfera, la composición del medio y el tiempo de incubación.
PROCEDIMIENTO
Tipo de muestra: Liquida, jugo de naranja marca tampico.
• Mezclar muy bien la muestra para asegurar su homogenización
• Desinfecte con alcohol al 70% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra
• Abrir aséptica y adecuadamente la muestra
• Pesar 10 gr del alimento (10 ml para alimentos líquidos)
• Homogenizar el alimento en 90 ml de agua peptonada al 0.1% (dilución 10-1). Dejar en reposo 10 minutos.
• Preparar la dilucion10-2 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-1 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.
• Preparar la dilucion10-3 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-2 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.
• Antes de sembrar se debe homogenizar la muestra
• Se toma 1 ml de la dilución a sembrar y se coloca el inoculo en una caja de petri. Sembrar 1 caja por cada dilución
• Se alista el medio caliente (45ªC) y se sirve aproximadamente de 15-20 ml de agar por caja
• Se homogeniza con el inoculo haciendo formas de 8 sucesivamente en ambas direcciones. (otra manera: Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces, rotar la caja 5 veces en el sentido de las agujas del reloj, mover la caja 5 veces haciendo ángulo recto sobre el movimiento, rotar la caja 5 veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.
• Se deja solidificar. IMPORTANTE: No debe transcurrir mas de 20 minutos entre la realización de las diluciones y el vertido del medio.
• Se lleva a incubar a 37ºC durante 48 horas
• Hacer control de esterilidad al medio de cultivo incubando una caja que contenga agar plate count
• Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1%, incubando una caja que contenga 1 ml de agua peptonada y agar plate count.
• Se hace el recuento en ufc/gr
Cálculo e interpretación:
• Seleccionar la caja que presente entre 25 y 250 colonias
• Contar todas las colonias y multiplicarla por el factor de dilución
• Reportar como unidades formadoras de colonias ufc/gr o ml
PREGUNTAS
¿Por que se deben esterilizar los medios de cultivo?
Para que ala hora de cultivar este nos permita ver conclaridad la colonias que queremos analizar; pero si el cultivo esta contaminado pueda ser que este nos represente otro tipo colonias y nos alteren nuestros resultados.
¿Si no se realizan los cálculos adecuadamente para la preparacion de los medios que puede ocurrir en el momento de sembrar?
Puede pasar que a la hora de sembrar, los calculos mal hechos nos alteren el analisis y no nos permita observar nada en las cajas petri.
Volver arriba
No hay comentarios:
Publicar un comentario