Analisis de mohos y levaduras en productos solidos

Analisis de mohos y levaduras en productos solidos

El presente informe se realizo con el fin de dejar como evidencia la práctica hecha en el laboratorio de microbiología sobre preparación de medios de cultivos, siembra y conteo de ufc (unidades formadoras de colonias) en alimentos sólidos al igual que manejo de equipos de laboratorio como el microscopio, el autoclave, la estufa, el stomacher entre otros equipos importantes para la realización de esta practica.



Materiales


• Muestra de alimento a analizar (sólido o liquido)

• Bolsas plásticas para stomacher

• Tubos Tapa Rosca Estéril

• Bascula

• Stomacher

• Agua peptonada al 0.1%

• Vortex

• Cajas de petri estéril

• Pipetas estéril de 1 ml

• Agar SABORAUD

• Incubadora a 24ºC

• Contador de colonias



Procedimiento


• Mezclar muy bien la muestra para asegurar su homogenización

• Desinfecte con alcohol al 70% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra

• Abrir aséptica y adecuadamente la muestra

• Pesar 10 gr del alimento (10 ml para alimentos líquidos)



• Homogenizar el alimento en 90 ml de agua peptonada al 0.1% (dilución 10-1). Dejar en reposo 10 minutos.




• Preparar la dilucion10-2 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-1 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.



• Preparar la dilucion10-3 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-2 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.



• Antes de sembrar se debe homogenizar la muestra




• Se toma 1 ml de la dilución a sembrar y se coloca el inoculo en una caja de petri. Sembrar 1 caja por cada dilución

• Se alista el medio caliente (45ªC) y se sirve aproximadamente de 15-20 ml de agar por caja

• Se homogeniza con el inoculo haciendo formas de 8 sucesivamente en ambas direcciones. (otra manera: Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces, rotar la caja 5 veces en el sentido de las agujas del reloj, mover la caja 5 veces haciendo ángulo recto sobre el movimiento, rotar la caja 5 veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.




• Se deja solidificar.



IMPORTANTE: No debe transcurrir mas de 20 minutos entre la realización de las diluciones y el vertido del medio.

• Se lleva a incubar a 24ºC durante 5-7 dias Hacer control de esterilidad al medio de cultivo incubando una caja que contenga agar plate count
• Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1%, incubando una caja que contenga 1 ml de agua peptonada y agar plate count.

• Se hace el recuento en ufc/gr



• 1.2 Calculo e interpretación:


• Seleccionar la caja que presente entre 25 y 250 colonias

• Contar todas las colonias y multiplicarla por el factor de dilución

• Reportar como unidades formadoras de colonias ufc/gr o ml




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Partes del microscopio

LAS PARTES DE MICROSCOPIO


OBJETIVO



Son uno de los elementos más importantes del microscopio. Están formados por la reunión de varias lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse con mucho cuidado, pues cualquier golpe puede variar la posición de las lentes y averiarlas. Se atornillan a la parte del tubo o al revolver porta-objetivos. En cuanto a los objetivos tenemos dos clases:

Objetivos secos: Son los que se emplean mas corrientemente. Entre la lente frontal y el porta objetivos sólo hay aire. A este grupo pertenecen los objetivos de menores aumentos tales como 10X y 40X.

Objetivos de inmersión: Como se había mencionado anteriormente se llama así a aquellos en los cuales, para la observación de interponerse entre la lente frontal y la preparación un líquido como por ejemplo aceite

OCULARES



Los forman dos lentes separados por un diafragma y van montados en la parte superior del tubo. La lente superior se llama lente ocular; la inferior lente de campo.

CONDENSADOR




Consta de un sistema de lentes colocados bajo la platina. Su función es condensar el haz de rayos luminosos, permitiendo una iluminación uniforme del campo microscópico. Se acciona por medio de un tornillo, el cual permite graduar la intensidad.

FUENTE LUMINOSA



El Microscopio incorpora dos diafragmas:
- un diafragma de iluminación localizado tras la fuente luminosa denominado Pinhole de Excitación, cuya utilidad es eliminar la luz proveniente de planos superiores e inferiores al plano focal, aumentando con ello la claridad y resolución de la imagen; y
- un diafragma de detección, de tamaño variable situado delante del fotodetector, denominado Pinhole de Emisión


TUBO OPTICO



En el está instalado el sistema óptico. Esta constituido por dos tubos o cuerpos. Uno de ellos externo, en el cual se encuentran la cremallera y el ocular y otro interno adosado al interior, donde esta el objetivo. Son corrientes en los aparatos modernos los binoculares, que facilitan la visión con ambos ojos.



PLATINA



Es una pieza metálica redonda o cuadrada, donde se colocan las preparaciones; tiene en le centro una abertura por la cual pasan los rayos luminosos procedentes del sistema de iluminación. En los microscopios corrientes puede estar fija o adosada a un carro con los tornillos de cremallera que permiten dos movimientos de traslación para controlarla, y también, si los tornillos están graduados para medir sus desplazamientos. Las preparaciones sujetas con las platinas fijas, por medio de dos palanquitas móviles y en las platinas de carro por un reborde, en forma de escuadra y pestillo que le impide cualquier movimiento imprevisto.



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