El presente informe se realizo con el fin de dejar como evidencia la práctica hecha en el laboratorio de microbiología sobre preparación de medios de cultivos, siembra y conteo de ufc (unidades formadoras de colonias) en alimentos sólidos al igual que manejo de equipos de laboratorio como el microscopio, el autoclave, la estufa, el stomacher entre otros equipos importantes para la realización de esta practica.
Materiales
• Muestra de alimento a analizar (sólido o liquido)
• Bolsas plásticas para stomacher
• Tubos Tapa Rosca Estéril
• Bascula
• Stomacher
• Agua peptonada al 0.1%
• Vortex
• Cajas de petri estéril
• Pipetas estéril de 1 ml
• Agar SABORAUD
• Incubadora a 24ºC
• Contador de colonias
Procedimiento
• Mezclar muy bien la muestra para asegurar su homogenización
• Desinfecte con alcohol al 70% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra
• Abrir aséptica y adecuadamente la muestra
• Pesar 10 gr del alimento (10 ml para alimentos líquidos)
• Homogenizar el alimento en 90 ml de agua peptonada al 0.1% (dilución 10-1). Dejar en reposo 10 minutos.
• Preparar la dilucion10-2 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-1 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.
• Preparar la dilucion10-3 transfiriendo 1 ml de la dilución 10-2 , con pipeta de 1 ml a un tubo de dilución que contenga 9 ml de agua peptonada 0.1%, agitar cuidadosamente.
• Antes de sembrar se debe homogenizar la muestra
• Se toma 1 ml de la dilución a sembrar y se coloca el inoculo en una caja de petri. Sembrar 1 caja por cada dilución
• Se alista el medio caliente (45ªC) y se sirve aproximadamente de 15-20 ml de agar por caja
• Se homogeniza con el inoculo haciendo formas de 8 sucesivamente en ambas direcciones. (otra manera: Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces, rotar la caja 5 veces en el sentido de las agujas del reloj, mover la caja 5 veces haciendo ángulo recto sobre el movimiento, rotar la caja 5 veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.
• Se deja solidificar.
IMPORTANTE: No debe transcurrir mas de 20 minutos entre la realización de las diluciones y el vertido del medio.
• Se lleva a incubar a 24ºC durante 5-7 dias Hacer control de esterilidad al medio de cultivo incubando una caja que contenga agar plate count
• Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1%, incubando una caja que contenga 1 ml de agua peptonada y agar plate count.
• Se hace el recuento en ufc/gr
• 1.2 Calculo e interpretación:
• Seleccionar la caja que presente entre 25 y 250 colonias
• Contar todas las colonias y multiplicarla por el factor de dilución
• Reportar como unidades formadoras de colonias ufc/gr o ml
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